Em bioquímica, o ácido 2,2’-azino-bis(3-etilbenzotiazolina-6-sulfónico), ou ABTS, é um composto químico usado para a observação da cinética da reacção de determinadas enzimas, nomeadamente na técnica de ELISA (Enzime-linked Immunosorbent Assay).
O ABTS, cuja fórmula química é C18H18N4O6S4, é um sólido com cor amarelo-esverdeada a verde. Tem uma massa molar de 548.68 g/mol, uma densidade de 1.7 e um índice de refracção de 1,774. Este dissolve-se em água, apresentando uma solubilidade de 50 mg/mL, dando origem, aquando na sua forma reduzida, a soluções claras ligeiramente amarelo-esverdeadas, límpidas (podendo apresentar, por vezes, uma ligeira tubidez). As soluções devem ser preparadas de fresco e guardadas em gelo, protegidas da luz, até serem usadas (nestas condições, as soluções de ABTS devem permanecer sem alterações na absorvância por 10 horas). As soluções de ABTS são muito sensíveis a oxidação, em especial na presença de catiões de metais pesados.
Este composto é muito usado como substrato, juntamente com peróxido de hidrogénio para peroxidases, ou sozinha para oxidases com núcleos de cobre, como a lacase ou a bilirrubina oxidase. A redução do peróxido de hidrogénio catalisada pela peroxidase a água ocorre de forma acoplada à oxidação do ABTS (perda de um eletrão), dando origem a um catião radical metastável. Este catião, em solução, apresenta cor azul / verde intensa, com um comprimento de onda máximo de 414 nm e picos adicionais aos 395, 640 e 725 nm. A forma reduzida tem um pico característico aos 340 nm. Este composto tem o ponto isosbéstico aos 375 nm (aproximadamente).
O uso do ABTS permite o estudo da cinética das peroxidases, ou estudos indirectos de cinéticas de reacção de enzimas produtoras de H2O2, ou simplesmente para quantificação dos níveis de peróxido de hidrogénio numa amostra.
Os potenciais de redução do ABTS são suficientemente elevados para que este actue como dador de electrões para a redução de espécies oxo como oxigénio molecular e peróxido de hidrogénio, particularmente a condições de pH fisiológico. Nestas condições, os grupos sulfonato ficam completamente desprotonados – o ABTS passa para o estado de dianião.
ABTS–· + e– → ABTS2– E°′ = 0.67 V (versus elétrodo padrão de hidrogénio)
ABTS + e– → ABTS–· E°′ = 1.08 V (versus elétrodo padrão de hidrogénio)
A forma oxidada deste composto é então quantificada por espectrofotometria, dado tratar-se de um produto de reacção corado.
O ABTS também é frequentemente usado na Industria alimentar e agrícola, para medir os níveis de antioxidantes de determinados alimentos. Nestes ensaios, o ABTS é convertido À forma oxidada por adição de persulfato de sódio, formando um produto corado com absorvância máxima aos 734 nm. Este catião radical é reage na presença de fenóis, tióis e/ou Vitamina C. Durante esta reacção, o ABTS oxidado é convertido de volta à sua forma reduzida, incolor. A monitorização das variações de absorvância permite quantificar os antioxidantes presentes na amostra. Este ensaio corresponde ao ensaio de capacidade de equivalentes de antioxidantes Trolox (TEAC). Neste ensaio, as amostras são comparadas a um controlo, no qual se usa o Trolox, um análogo da vitamina E.
Fontes: Wikipédia | Sigma-Aldrich – Product Info | ABTS – Sigma-Aldrich Product Spec | ChemSpider