O teste de Berthelot é um teste utilizado em química analítica, na quantificação de amoníaco. O reagente usado neste teste é composto por uma solução alcalina de fenol e hipoclorito, o qual reage com o amoníaco e forma um produto de cor azul (indofenol). Este produto final pode então ser quantificado espectrofotometricamente. Este reagente pode também ser usado para a determinação de ureia. Neste caso, a enzima urease é usada para catalisar a hidrólise da ureia, originando dióxido de carbono e amoníaco, o qual pode ser então quantificado por este método colorimétrico. Adicionalmente, o teste de Berthelot pode ser usado para quantificar nitritos e nitratos em solos e águas após conversão, através da sua redução a amoníaco através do uso da liga de Devarda.
O fenol pode ser substituído por diversos compostos fenólicos, sendo o salicilato de sódio o substituto mais comum, pois é significativamente menos tóxico que o fenol. O 2-fenilfenol também tem sido usado como substituto do fenol na análise de amoníaco total em amostras de águas e de solos, uma vez que reduz interferências causadas por outros constituintes, nomeadamente aminas, das amostras e aumenta a estabilidade da cor do produto final a valores de pH mais baixos.
Esquema reaccional do teste de Berthelot. Nesta versão, salicilato foi utilizado em vez de fenol. Primeiro o amoníaco reage com hipoclorito, originando uma cloroamina (1); de seguida, a cloroamina reage com o composto fenólico em condições alcalinas, originando o cromóforo de cor azul-esverdeada (2).
Uma versão mais moderna deste teste tem sido usada para determinar a concentração de ureia no sangue. Neste caso, a urease hidrolisa a ureia a amoníaco e ácido carbâmico, o qual se decompõe espontaneamente em dióxido de carbono e amoníaco. O amoníaco reage com salicilato, nitroferricianeto e uma solução alcalina de hipoclorito, originando um cromóforo azul-esverdeado cuja intensidade de cor é proporcional à sua concentração.
Procedimento (versão modificada)
- Adicionar à amostra uma solução aquosa de salicilato de sódio e de nitroferricianeto de sódio (no caso da quantificação de ureia, adicionar a enzima e encubar a 37 ºC por 5 minutos).
- Adicionar à mistura uma solução aquosa de hidróxido de sódio e hipoclorito de sódio, homogeneizar e incubar à temperatura ambiente por 10 minutos.
- Preparar diluições de uma amostra padrão para traçar a curva de calibração.
- Ler absorvância a 630 nanómetros (o branco contém todos os constituintes supracitados, excepto a amostra).
Fontes: Wikipédia | POINTE Scientific Inc | IORodeo