O teste do citrato é um teste de microbiologia usado para identificar se um dado microrganismo é capaz de utilizar citrato como única fonte de carbono.
Princípio básico
A suspensão de bactérias é plaqueada num meio de cultura que contém citrato de sódio e um indicador de pH, geralmente o azul de bromotimol. O meio contém ainda sais inorgânicos de amónio (fonte de azoto). O uso do citrato envolve a presença da enzima citrase, que converte duas moléculas numa molécula de oxaloacetato e uma de acetato. O oxaloacetato é depois convertido a piruvato e dióxido de carbono (CO2). A formação de bicarbonato de sódio (NaHCO3) e amoníaco (NH3), resultante da utilização de citrato de sódio e de sais de amónio, leva a um aumento do pH do meio de cultura e, consequentemente, à alteração da cor do mesmo de verde para azul.
Procedimento
Colónias de bactérias são inoculadas numa placa de meio Simmons citrato agar (não inocular muita biomassa) e incubadas overnight (de um dia para o outro) a 37 ºC. O uso de meio líquido não é recomendado.
Teste do citrato: resultado positivo (esquerda), representado pelo crescimento de Raoultella planticola; resultado negativo (direita) representado pelo crescimento de Proteus myxofaciens.
Resultado positivo – observa-se uma mudança de cor do meio de cultura de verde para azul. A alteração de cor, por norma, é observada em 24-48 horas. No entanto, crescimento bacteriano no meio de cultura também é considerado como resultado positivo, mesmo na ausência de mudança de cor.
Exemplos: Klebsiella pneumoniae; Frateuria aurantia
Resultado negativo – ausência de mudança de cor e de crescimento bacteriano.
Exemplos: Escherichia coli
Meio de Cultura Simmons Citrate Agar
- Fosfato de amónio – fonte de azoto
- Hidrogenofosfato de potássio – agente tamponante do pH
- Cloreto de sódio – balanço osmótico
- Citrato de sódio – fonte de carbono
- Sulfato de Magnésio – cofactor para uma variedade de reacções metabólicas
- Azul de bromotimol – indicador de pH
- Agar – agente gelificante
Fontes: Wikipédia | Neogen Corporation